HPLC의 기본definition 및 기초원리
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작성일 23-05-11 03:55
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크기인자(Capacity factor, k)
일반적으로 컬럼의 효율을 증가시키려면 N값을 크게하는데 컬럼길이를 증가시키거나 정지상 충전물의 입자를 작게 한다.
시료가 분리되려면 정지상에 적당히 머무르게 할 필요가 있는데 이 머무르게 하는 효과를 크기인자라 한다. 그런데 시료물질의 머무른 시간이나 머무른 부피의 절대값은 실제로 얻기 어렵다. 즉 이 α값은 시료중 각 constituent 의 크기인자(k)값의 비로서 나타낸다. 왜냐하면 test(실험) 조건에 따라 같은 물질의 tR이나 VR값이 달라지기 때문이다 그래서 미지의 물질을 확인하기 위해서는 기지의 물질이 가지는 tR`과 VR`값과 미지 물질의 tR과 VR의 test(실험) 값을 비교함으로써 정성분석이 가능하다.
분리도(Resolution, Rs)
크로마토그램에서 각 시료 성분의 피크에 해당되는 부피 또는 시간을 각각 머무른 부피(VR) 및 머무른 시간(tR)이라 하는데 이 값을 용매피크의 머무름(tM)에 대하여 보정한 tR-tM과 VR-VM을 각각 tR`과 VR`으로 표시하고 조정된 머무른 시간 혹은 부피라고 한다. 그래서 미지의 물질을 확인하기 위해서는 기지의 물질이 가지는 tR`과 VR`값과 미지 물질의 tR과 VR의 실험값을 비교함으로써 정성분석이 가능하다. 그런데 시료물질의 머무른 시간이나 머무른 부피의 절대값은 실제로 얻기 어렵다. 또한 혼합물중의 각 constituent 이 컬럼에서 분리된 상태로 용출되기 위해서는 서로 다른 k값을 가지고 이동해야한다.
순서
H값은 컬럼의 효율이 커질수록 감소한다. 이 값은 일정한 정지상에 대하여 이동상의 선택으로 크게 alteration(변화) 시킬 수 있는 인자이다.
다. 이 단理論(이론)은 용질의 이동속도와 용리띠의 모양을 계산하는 식은 제공하지만 용질의 띠가 용리도중에 넓어지는 현상에 대한 충분한 설명(說明)은 할 수 없다. 즉 H값이 작아질수록 같은 컬럼길이에서 일어나는 평형의 수는 증가하게된다된다.
크로마토그래피의 컬럼효율은 Matrin과 Synge에 의해 “컬럼단 理論(이론)(plate theory)으로 설명(說明)되었다. 實驗(실험)적으로 N값은 피크의 폭(W)과 머무른 시간 tR을 구하여 다음 식에 의해 계산한다. 즉 ”컬럼은 수많은 정지상 입자의 단(층)으로 충전되어 있다“는 관념을 도입하고 이 理論(이론)적 단수를 N으로 표시하며 이 N을 컬럼효율의 척도로 사용한다. 컬럼단이 理論(이론)대로라고 한다면 N값과 컬럼길이 L을 알면 가상적이긴 하지만 한 단의 높이를 계산할 수 있다. 보통 Rs는 한 constituent 의 피크가 베이스라인까지 완전히 내려온 후 다른 constituent 의 피크가 나타난 경우에 다음 식으로 계산한다. 실제입자의 지름은 이 높이와 다르지만 용리결과를 조정하는데 중요한 값이 된다된다. 이 값은 시료의 조정된 머무른 시간 tR`과 용매피크의 머무른 시간 tM의 비로 구할 수 있다. 이 가상적인 한 단의 높이를 理論(이론)단 해당높이(Height equivalent to theoretical plate, HETP)라하고 H로 표시하는데 관계식은 다음과 같다. 왜냐하면 실험조건에 따라 같은 물질의 tR이나 VR값이 달라지기 때문이다. 이러한 혼합물을 분리할 때 컬럼에서 용출되는 각 constituent 의 분리상태를 나타내는 인자를 분리인자(separation or selectivity factor)라 하고 α로 표시한다. 예를 들어 화합물 A와 B의 k값이 같아서 α=1이라면 두 constituent 은 전혀 분리되지 않는 것을 의미한다.
HPLC의 기본definition 및 기초원리
크로마토그램에서 각 시료 성분의 피크에 해당되는 부피 또는 시간을 각각 머무른 부피(VR) 및 머무른 시간(tR)이라 하는데 이 값을 용매피크의 머무름(tM)에 대하여 보정한 tR-tM과 VR-VM을 각각 tR`과 VR`으로 표시하고 조정된 머무른 시간 혹은 부피라고 한다.
컬럼효율과 理論(이론)단 해당높이(HETP)
분리인자(Separation factor, α)
주어진 實驗(실험)조건 즉 일정한 정지상과 이동상에서 일정한 유속, 온도 및 동일한 시료주입조건일 때 N값은 거의 일정하다.HPLC,기초원리,크로마토그래피
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설명
분리도는 인접되는 constituent 들간의 분리된 정도를 정량적으로 나타낸 값이다. 만일 tR이 일정하다면 N값이 증가함에 따라 피크폭 W는 좁아지게 되어 좋은 크로마토그램을 얻게된다된다.
레포트 > 공학,기술계열
어떤 實驗(실험)에서 크기인자가 일치하는 constituent 이 존재한다면 그 constituent 들은 분리가 안된다된다.
