생명화학실험 - RT-PCR, Bradford assay, SDS page, Genomic DNA prep
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작성일 23-02-06 21:02
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더구나 intron sequence는 일부를 제외하고는 중요성이 떨어진다고 인식되어 밝히지 않은 것이 많아 GenBank에서도 찾을 수 없는 경우가 많다. 그리고 Gene specific primer를 사용하면 target gene만 cDNA로 만들어지게 된다 그리고 random primer를 넣고 反應(반응)시키면 길이도 다양하고 모든 RNA(rRNA, tRNA 포함)가 모두 cDNA로 만들어진다.
Bradford Assay
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Oligo(dT) primer를 쓰면 분리한 RNA 중 mRNA는 모두 cDNA로 만들어진다. 하지만 intron은 exon에 비해서 매우 크기 때문에 exon 중에 몇 개를 한꺼번에 증폭하려면 DNA로는 힘들다. Random primer는 잘 안될 것 같지만 뜻밖에도 결과가 좋아서 현재 많이 쓰이는 방법이다. 즉 cDNA pool이 만들어지는 셈이다.
UV-Visible spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정(measurement)하여 standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정(measurement)하는 방법 중 하나이다. Dye로는 Coomassie Blue G-250를 사용하며, 이 dye가 단백질과 결합해 생기는 파장의 change(변화)를 측정(measurement)한다.
순서
DNA 에서는 exon과 intron이 있으므로 DNA를 template로 하는 경우에는 exon과 intron이 모두 증폭될 수 있따 하지만 intron은 exon에 비해서 매우 크기 때문에 exon 중에 몇 개를 한꺼번에 증폭하려면 DNA로는 힘들다.
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DNA 에서는 exon과 intron이 있으므로 DNA를 template로 하는 경우에는 exon과 intron이 모두 증폭될 수 있다.
다. 더구나 intron sequence는 일부를 제외하고는 중요성이 떨어진다고 인식되어 밝히지 않은 것이 많아 GenBank에서도 찾을 수 없는 경우가 많다. 목적에 따라 다르겠지만, 처음 RT-PCR을 할 때는 우선 random hexamer를 써보고 잘 안되면 다른 것을 시도해 보는게 좋다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다.
