DNA증폭법
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작성일 24-09-04 23:41
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실제로는 PCR에 사용하는 Taq polymerase의 활성 온도 이상의 annealing temperature를 가지는 primer는 사용할 수 없다.
4. Extension
Taq polymerase가 primer의 3ꡑend의 free OH기를 처음 점으로 해서 single strand template의 상보적인 dNTP를 가져와서 붙여 나가며 chain extension을 시행한다.
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설명
3. Annealing
Single strand로 풀어진 templates에 primer가 각각의 상보적인 sequence를 찾아서 biding하는 과정으로 binding, annealing, hybridization등 다양한 용어로 부른다. PCR의 최종적인 sensitivity와 specificity를 결정하는 제일 중요한 과정이다. 이 과정에서 primer가 biding하여 free 3ꡑ end를 제공하면 여기서 polymerase가 chain extension을 처음 한다. 처음 cycle에서는 template를 기준으로 합성이 되므로 target sequence와는 상관없이 3ꡑ방향으로 60 bps/sec의 …(To be continued )
1. Final products of first cycle
2. Denaturation
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다. Primer는 templates 같은 긴 DNA와는 달리 보통 15 bps이상 30bps이하의 oligonucleotide를 사용하는데 이런 짧은 DNA의 hybridization temperature를 결정하는 데에는 length, GC content, pH, salt concentration등 여러 요소가 effect을 미친다.
