[중요] 단백질 정량 결과보고서
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작성일 23-03-20 10:33
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* 여기에 85% phosphoric acid 100 ml을 넣고 잘 섞는다. * 50 ml의 95% 에틸알코올에 100 mg의 Coomassie Brillant Blue G-250을 녹인다.
b. 1번에서 희석한 각각의 시료 중 5μl을 섞는다.
c. 이 중에 5μl씩 사용한다. (이때 duplicate으로 實驗(실험))
(4) 시료의 단백질 양 측정하기
4) Milk.
5. Method
a. Bradford solution 495μl를 EP-tube에 넣는다.
[중요] 단백질 정량 결과보고서
( 이 때 너무 파이펫팅 중요! 너무 세게 뿌리면 well밖으로 loss가 생긴다.
단백질 정량, BSA, Bradford assay
3) Spectrophotometer와 Quartz cuvettes.
a. Bradford solution을 total 200μl씩 넣는다.
b. 3번에서 만들어 놓은 용액 중에 200μl씩 96-well 중 2개 well에 조심스럽게 넣는다. )
b. 이 때 나머지 볼륨은 DW로 채운다.
(5) 흡광도 측정하기
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* BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다.
4. Material
설명
단백질 정량 결과레포트
순서
(3) Bradford와 시료 섞기
2) Protein Standard
(2) 기준용액(standard solution)만들기
a. 96-well plate 뚜껑에 측정할 시료이름을 쓴다.
b. 둘을 비교하여 단백질 양을 계산한다.
단백질 정량 결과보고서
1) Protein reagent (Bradford reagent)
* 증류수를 넣어서 총량이 200 ml이 되게 한다 (이 농축 염색약은 4 ℃에서 약 6개월 동안 보관 가능). 실제 시료에 넣는 염색약은 중류수 4 volume을 넣은 희석 염색약을 사용한다.
( 예를 들어 BSA 2μl짜리에는 Bradford 198μl넣기 )
(1) 시료 만들기
a. 595nm 파장에서 standard 흡광도와 시료 흡광도를 측정한다. (시료 수만큼:5개)
a. Milk를 1, 1/2, 1/4, 1/10, 1/50, 1/100 농도가 되도록 희석한다.
b. BSA 1mg/ml 을 0, 2, 4, 8, 12μl씩 96well-plate에 직접 넣는다.
다.
